文章目录

1 材料与方法

1.1 材料

1.2 方法

    1.2.1 模板制备

    1.2.2 Bst DNA聚合酶的选择

    1.2.3 PSR体系

    1.2.4 一管法试剂盒的组装

    1.2.5 结果判定用两种方法观察PSR结果。

        1.2.5. 1 浊度法

        1.2.5. 2 显色法

    1.2.6 PSR方法灵敏度验证

        1.2.6. 1 PSR方法灵敏度试验

        1.2.6. 2 与PCR的灵敏度比较

    1.2.7 PSR方法特异性验证

1.3 临床样本检测

2 结果

2.1 最佳反应温度的筛选

2.2 Bst DNA聚合酶的选择

2.3 特异性验证

2.4 PSR敏感性试验

2.5 临床样本验证

3 讨论

文章摘要:目的为了满足现场监测和实验室快速检测的需求,建立基于聚合酶螺旋反应(PSR)技术的甲型H1N1流感病毒核酸可视化检测方法。方法基于甲型H1N1流感病毒PSR反应体系,利用Bst DNA聚合酶链置换活性,通过添加p H指示剂、调整引物浓度,优化可视化PSR检测方法。结果可视化PSR方法可在60 min内得到结果,最佳反应温度为66℃,最低检测限为120拷贝/μl,其他常见的呼吸道病毒如呼吸道合胞病毒、人腺病毒、人偏肺病毒,以及甲型H3N2、H5N1、H7N9流感病毒均未发现特异扩增。结论可视化PSR扩增方法为甲型H1N1流感病毒的现场快速检测提供了新途径。

文章关键词:甲型H1N1流感病毒,聚合酶螺旋反应,等温扩增,可视化,

项目基金:国家重点研发计划项目（2016YFF0203203,2018YFF0214900）,

论文作者:施琦¹ 邹大阳² 杨宇¹ 慈颖¹ 张乔¹ 聂聪¹ 张永江¹ 刘威² 王静¹ 

作者单位:1. 中国检验检疫科学研究院卫检所 2. 中国人民解放军疾病预防控制中心 

论文DOI: 10.16408/j.1004-9770.2021.04.004

论文分类号: R446.5;R511.7

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