文章摘要:为研究苦荞金属硫蛋白（FtMT）的生物学功能，制备具有穿膜活性的重组FtMT。采用基因重组技术，分别将FtMT和融合穿膜肽的Tat-FtMT、11R-FtMT编码基因定向克隆至碱性磷酸盐启动子（phoA）分泌型原核表达载体，转化大肠杆菌BL21（DE3）。通过低磷酸盐诱导重组蛋白可溶表达后，经镍柱亲和层析分离纯化，利用SDS-PAGE、Western blot和紫外光谱扫描分析、鉴定。采用电感耦合等离子原子发射光谱仪（ICP-OES）和比色法分析重组FtMT蛋白金属结合特性和羟自由基清除活性。采用免疫荧光法检测穿膜肽介导的FtMT蛋白的穿膜活性，通过MTT细胞增殖试验分析穿膜肽-FtMT融合蛋白对胰岛细胞Ins-1和心肌细胞H9c2在高糖、高脂及缺氧毒性条件下氧化损伤的保护作用。结果表明，获得纯度较高的可溶性FtMT、Tat-FtMT和11R-FtMT重组蛋白，3种重组蛋白具有几乎一致的金属-巯基簇特征吸收峰，具有较强的金属离子结合能力和羟自由基清除活性。穿膜活性试验证实Tat-FtMT和11R-FtMT蛋白较FtMT具有显著的跨膜转运功能（P<0.05），外源穿膜肽-FtMT融合蛋白可通过跨膜进入胞内，显著降低Ins-1和H9c2由高糖、高脂以及缺氧毒性导致的氧化损伤（P<0.05）。试验成功实现了重组穿膜肽-FtMT融合蛋白的表达，在细胞水平分析其抗氧化损伤作用，为FtMT的食药资源开发、应用奠定基础。

文章关键词:苦荞,金属硫蛋白,穿膜肽,抗氧化,糖尿病,

项目基金:山西省自然科学基金面上项目（201901D111450）,山西省重点研发计划项目（201703D321026-1）,国家现代农业（燕麦荞麦）产业体系建设专项（CARS-07-E2）,