文章摘要:目的·采用生物化学和结构生物学的方法，制备和结晶高纯度的新型口腔细菌丝氨酸蛋白酶抑制剂Tannerpin。方法·通过氨基酸序列分析，在牙周疾病相关细菌中筛选得到新型丝氨酸蛋白酶抑制剂，并将其命名为Tannerpin；构建融合表达载体pSUMO3-Tannerpin，将其转入大肠埃希菌BL21 (DE3)系统进行诱导表达；采用镍离子亲和层析、SUMO特异性蛋白酶2 (SUMO-specific protease 2,SENP2)酶切和凝胶过滤层析组合的纯化方案对Tannerpin进行分离纯化，并经十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）进行验证；而后，对该纯化蛋白的结晶条件进行筛选及优化，并对其作用底物进行筛选。结果·SDS-PAGE结果显示，SUMO3-Tannerpin融合蛋白在大肠埃希菌中成功表达。利用纯化方案去除该蛋白的融合标签后，获得了相对分子质量约为43 000的Tannerpin。通过结晶条件的初筛和优化，最终在20℃、pH=6.0、沉淀剂为28%聚乙二醇3350和8%Tacsimate的条件下获得了分辨率为1.7?的Tannerpin晶体。然而，未筛选到Tannerpin的作用底物。结论·成功制备了口腔细菌分泌的新型丝氨酸蛋白酶抑制剂Tannerpin及其晶体，或将为后续其结构分析及功能研究奠定基础。

文章关键词:口腔细菌,新型丝氨酸蛋白酶抑制剂,原核表达,纯化,结晶,

论文作者:杨婷婷 许佳伟 周爱武 叶玮 

作者单位:遵义医科大学珠海校区 上海交通大学医学院病理生理学系 

论文分类号: TQ464.8

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